मेणबत्ती आणि साबण बनवण्यासाठी शुद्ध सपोश्निकोव्हिया डिव्हेरिकाटा तेल घाऊक डिफ्यूझर आवश्यक तेल रीड बर्नर डिफ्यूझरसाठी नवीन

संक्षिप्त वर्णन:

 

२.१. SDE ची तयारी

SD चे rhizomes वाळलेल्या औषधी वनस्पती म्हणून Hanherb Co. (Guri, Korea) कडून खरेदी केले होते. कोरिया इंस्टिट्यूट ऑफ ओरिएंटल मेडिसिन (KIOM) च्या डॉ. गो-या चोई यांनी वनस्पती सामग्रीची वर्गीकरणानुसार पुष्टी केली. एक व्हाउचर नमुना (क्रमांक 2014 SDE-6) मानक हर्बल संसाधनांच्या कोरियन हर्बेरियममध्ये जमा करण्यात आला. SD (320 ग्रॅम) च्या वाळलेल्या rhizomes 70% इथेनॉल (2 h रिफ्लक्ससह) सह दोनदा काढले गेले आणि नंतर कमी दाबाने अर्क केंद्रित केले गेले. डेकोक्शन फिल्टर, लिओफिलाइज्ड आणि 4 डिग्री सेल्सिअस तापमानात साठवले गेले. कच्च्या सुरुवातीच्या सामग्रीपासून वाळलेल्या अर्काचे उत्पादन 48.13% (w/w) होते.

 

२.२. परिमाणात्मक उच्च-कार्यक्षमता लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (HPLC) विश्लेषण

HPLC प्रणाली (Waters Co., Milford, MA, USA) आणि फोटोडायोड ॲरे डिटेक्टरसह क्रोमॅटोग्राफिक विश्लेषण केले गेले. SDE च्या HPLC विश्लेषणासाठी, प्राथमिक-O- ग्लुकोसिलसिमिफुगिन मानक कोरिया प्रमोशन इन्स्टिट्यूट फॉर ट्रेडिशनल मेडिसिन इंडस्ट्री (ग्योंगसान, कोरिया) कडून खरेदी केले गेले होते आणिसे-ओ-ग्लुकोसिलहमाउडॉल आणि 4′-O-β-डी-ग्लुकोसिल-5-O-मेथिलविसामिनॉल आमच्या प्रयोगशाळेत वेगळे केले गेले आणि स्पेक्ट्रल विश्लेषणाद्वारे ओळखले गेले, प्रामुख्याने NMR आणि MS द्वारे.

SDE नमुने (0.1 mg) 70% इथेनॉल (10 mL) मध्ये विसर्जित केले गेले. XSelect HSS T3 C18 स्तंभ (4.6 × 250 मिमी, 5) सह क्रोमॅटोग्राफिक पृथक्करण केले गेलेμm, Waters Co., Milford, MA, USA). मोबाइल फेजमध्ये 1.0 mL/min च्या प्रवाह दराने पाण्यात (B) acetonitrile (A) आणि 0.1% ऍसिटिक ऍसिड असते. खालीलप्रमाणे मल्टीस्टेप ग्रेडियंट प्रोग्राम वापरला गेला: 5% A (0 मि), 5-20% A (0-10 मि), 20% A (10-23 मि), आणि 20-65% A (23-40 मि. ). शोध तरंगलांबी 210-400 nm वर स्कॅन केली गेली आणि 254 nm वर रेकॉर्ड केली गेली. इंजेक्शनची मात्रा 10.0 होतीμएल. तीन क्रोमोन्सच्या निर्धारासाठी मानक उपाय 7.781 mg/mL (प्राइम-O-ग्लुकोसिलसिमिफुगिन), 31.125 mg/mL (4′-O-β-डी-ग्लुकोसिल-5-O-मेथिलविसामिनॉल), आणि 31.125 mg/mL (से-ओ-ग्लुकोसिलहॅमोडॉल) मिथेनॉलमध्ये आणि 4°C वर ठेवले जाते.

२.३. विरोधी दाहक क्रियाकलाप मूल्यांकनविट्रो मध्ये

२.३.१. सेल संस्कृती आणि नमुना उपचार

RAW 264.7 पेशी अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (ATCC, Manassas, VA, USA) मधून मिळवल्या गेल्या आणि 1% प्रतिजैविक आणि 5.5% FBS असलेल्या DMEM माध्यमात वाढल्या. पेशी 37°C वर 5% CO2 च्या आर्द्र वातावरणात उष्मायन केल्या गेल्या. पेशींना उत्तेजित करण्यासाठी, माध्यम ताजे DMEM माध्यम आणि लिपोपॉलिसॅकेराइड (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ने बदलले.μSDE (200 किंवा 400) च्या उपस्थितीत किंवा अनुपस्थितीत g/mL जोडले गेलेμg/mL) अतिरिक्त २४ तासांसाठी.

२.३.२. नायट्रिक ऑक्साईड (NO), प्रोस्टॅग्लँडिन E2 (PGE2), ट्यूमर नेक्रोसिस फॅक्टरचे निर्धारण-α(TNF-α), आणि इंटरल्यूकिन -6 (IL-6) उत्पादन

पेशींवर SDE ने उपचार केले गेले आणि 24 तासांसाठी LPS सह उत्तेजित केले गेले. मागील अभ्यासानुसार ग्रीस अभिकर्मक वापरून नायट्रेटचे मोजमाप करून कोणत्याही उत्पादनाचे विश्लेषण केले गेले नाही [12]. दाहक साइटोकिन्स PGE2, TNF- चे स्रावα, आणि IL-6 निर्मात्याच्या सूचनांनुसार ELISA किट (R&D सिस्टम) वापरून निर्धारित केले गेले. NO आणि साइटोकाइन उत्पादनावर SDE चे परिणाम 540 nm किंवा 450 nm वर Wallac EnVision वापरून निर्धारित केले गेले.™मायक्रोप्लेट रीडर (पर्किनएलमर).

२.४. Antiosteoarthritis क्रियाकलाप मूल्यांकनVivo मध्ये

२.४.१. प्राणी

नर स्प्रेग-डॉले उंदीर (7 आठवडे जुने) समताको इंक. (ओसान, कोरिया) कडून खरेदी केले गेले आणि 12-तास प्रकाश/गडद चक्रासह नियंत्रित परिस्थितीत ठेवण्यात आले.°C आणि% आर्द्रता. उंदरांना प्रयोगशाळेत आहार आणि पाणी देण्यात आलेजाहिरात लिबिटम. सर्व प्रायोगिक प्रक्रिया नॅशनल इन्स्टिट्यूट ऑफ हेल्थ (NIH) मार्गदर्शक तत्त्वांचे पालन करून पार पाडल्या गेल्या आणि डेजॉन युनिव्हर्सिटी (डेजॉन, कोरिया प्रजासत्ताक) च्या प्राणी काळजी आणि वापर समितीने मंजूर केले.

२.४.२. उंदीर मध्ये MIA सह OA ची स्थापना

अभ्यास सुरू होण्यापूर्वी प्राणी यादृच्छिक केले गेले आणि उपचार गटांना नियुक्त केले गेले (प्रति गट). MIA सोल्यूशन (3 mg/50μ०.९% सलाईनचे एल) केटामाइन आणि झायलाझिनच्या मिश्रणाने ऍनेस्थेसिया अंतर्गत उजव्या गुडघ्याच्या इंट्रा-आर्टिक्युलर जागेत थेट इंजेक्शन दिले गेले. उंदीर यादृच्छिकपणे चार गटांमध्ये विभागले गेले: (1) MIA इंजेक्शन नसलेला खारट गट, (2) MIA इंजेक्शनसह MIA ​​गट, (3) MIA इंजेक्शनसह SDE-उपचार केलेला गट (200 mg/kg) आणि (4) ) इंडोमेथेसिन- (IM-) उपचारित गट (2 mg/kg) MIA इंजेक्शनसह. एमआयए इंजेक्शनच्या 1 आठवड्यापूर्वी 4 आठवडे SDE आणि IM सह उंदीर तोंडी प्रशासित केले गेले. या अभ्यासात वापरलेले SDE आणि IM चे डोस मागील अभ्यासात नियुक्त केलेल्यांवर आधारित होते [10,13,14].

२.४.३. हिंदपॉ वजन-असर वितरणाचे मोजमाप

OA इंडक्शननंतर, हिंदपॉजच्या वजन सहन करण्याच्या क्षमतेतील मूळ संतुलन विस्कळीत झाले. एक अक्षमता परीक्षक (लिंटन इन्स्ट्रुमेंटेशन, नॉरफोक, यूके) वजन सहन करणार्या सहिष्णुतेमधील बदलांचे मूल्यांकन करण्यासाठी वापरले गेले. उंदीर काळजीपूर्वक मापन कक्षात ठेवले होते. 3 सेकंदांच्या कालावधीत मागील अंगाद्वारे वजन सहन करणारी शक्ती सरासरी केली गेली. वजन वितरण गुणोत्तर खालील समीकरणानुसार मोजले गेले: [उजव्या मागच्या अंगावरील वजन/(उजव्या मागच्या अंगावरील वजन + डाव्या मागच्या अंगावरील वजन)] × 100 [15].

२.४.४. सीरम साइटोकाइन पातळीचे मोजमाप

रक्ताचे नमुने 4°C वर 10 मिनिटांसाठी 1,500 ग्रॅम सेंट्रीफ्यूज केले गेले; नंतर सीरम गोळा केले गेले आणि वापरेपर्यंत −70°C वर साठवले गेले. IL-1 चे स्तरβ, IL-6, TNF-α, आणि सीरममधील PGE2 चे मोजमाप निर्मात्याच्या सूचनांनुसार R&D सिस्टम्स (Minneapolis, MN, USA) मधील ELISA किट वापरून केले गेले.

२.४.५. रिअल-टाइम परिमाणात्मक RT-PCR विश्लेषण

गुडघ्याच्या सांध्यातील ऊतींमधून एकूण RNA काढण्यात आला TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), उलट-प्रतिलेखित cDNA आणि PCR-प्रवर्धित TM One Step RT PCR किट वापरून SYBR ग्रीन (अप्लाईड बायोसिस्टम) , Grand Island, NY, USA). अप्लाइड बायोसिस्टम 7500 रिअल-टाइम पीसीआर सिस्टम (अप्लाईड बायोसिस्टम, ग्रँड आयलंड, एनवाय, यूएसए) वापरून रिअल-टाइम परिमाणात्मक पीसीआर केले गेले. प्राइमर सीक्वेन्स आणि प्रोब सीक्वेन्स टेबलमध्ये दर्शविले आहेत1. निर्मात्याच्या सूचनांनुसार (Applied Biosystems, Foster, CA, USA) डीएनए पॉलिमरेझ असलेल्या TaqMan® युनिव्हर्सल पीसीआर मास्टर मिश्रणाने नमुना cDNAs आणि समान प्रमाणात GAPDH cDNA चे अलिकोट वाढवले ​​गेले. PCR स्थिती 50°C वर 2 मिनिटे, 94°C वर 10 मिनिटे, 95°C वर 15s, आणि 40 चक्रांसाठी 60°C वर 1 मिनिटे होती. निर्मात्याच्या निर्देशांनुसार, लक्ष्य जनुकाची एकाग्रता तुलनात्मक Ct (प्रवर्धन प्लॉट आणि थ्रेशोल्ड दरम्यान क्रॉस-पॉइंटवर थ्रेशोल्ड सायकल क्रमांक) पद्धती वापरून निर्धारित केली गेली.

एफओबी किंमत:US $0.5 - 9,999 / तुकडा

किमान ऑर्डर प्रमाण:100 तुकडे/तुकडे

पुरवठा क्षमता:10000 तुकडा/तुकडे प्रति महिना